КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ КАРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕЗРЕЛЫХ ПОЛОВЫХ КЛЕТОК ИЗ ЭЯКУЛЯТА КАК ЧАСТЬ ПРОТОКОЛА ОБСЛЕДОВАНИЯ МУЖЧИН С БЕСПЛОДИЕМ В БРАКЕ

Мужской фактор вносит значительный вклад в проблему бесплодного брака. Причиной бесплодия может быть изменение морфологических и/или функциональных характеристик половых клеток. В работе представлены результаты исследования 122 образцов эякулята, из них 55 образцов с нормальной (≥ 15 млн/мл) концентрацией сперматозоидов (1-я группа) и 67 образцов с концентрацией < 0,01) в образцах эякулята с нормальной концентрацией сперматозоидов (1-я группа), что указывает на наличие выраженного блока сперматогенеза на стадии профазы I мейоза. В образцах эякулята 2-й группы (с концентрацией < 1 млн/мл (криптозооспермия или тяжелая форма олигозооспермии) (2-я группа). Для всех выполняли стандартное спермиологическое исследование (WHO, 2010) и количественный кариологический анализ незрелых половых клеток эякулята (ККА НПК) (патент Л.Ф. Курило № 2328736,2007 г.). Выявлено, что показатели ККА НПК значимо различаются в 2 проанализированных группах. Доля НПК на стадиях прелептотены-зиготены и пахитены достоверно выше (p < 0,01) в образцах эякулята с нормальной концентрацией сперматозоидов (1-я группа), что указывает на наличие выраженного блока сперматогенеза на стадии профазы I мейоза. В образцах эякулята 2-й группы (с концентрацией< 1 млн/мл) значимо выше доля сперматоцитов II и сперматид, что говорит о наличии выраженного блока сперматогенеза на стадии формирования сперматозоидов (спермиогенеза). В 58 % образцов эякулята из 1-й группы индекс НПК превышал нормативные показатели. В большинстве образцов 2-й группы индекс НПК не рассчитывали из-за недостаточного количества сперматозоидов. У всех обследованных пациентов с подозрением на азооспермию при ККА НПК были обнаружены сперматозоиды (44 образца из 2-й группы). Таким образом, пациентам с предполагаемой азооспермией выполнение ККА НПК может быть рекомендовано как альтернатива диагностической биопсии яичка или его придатка. Оценка НПК на разных стадиях сперматогенеза, неинвазивность данного метода, относительная быстрота выполнения и возможность многократного повторения исследования без риска для здоровья пациента делают метод ККА НПК уникальным при оценке состояния сперматогенеза и его динамики.

1. Райцина С.С. Гормональный контроль сперматогенеза у млекопитающих. В кн.: Сперматогенез и его регуляция. Под ред. Л.О. Даниловой. М.: Наука, 1983. С. 3–61. [Raytsina S.S. Hormonal control of spermatogenesis in mammals. In: Spermatogenesis and its regulation. Ed.L. O. Danilova. Moscow: Nauka, 1983. P. 3–61. (In Russ.)].

2. Захидов С.Т., Кулибин А.Ю., Маршак Т.Л. Стволовые клетки и клетки ниши сперматогенной системы. В кн.: Биология стволовых клеток и клеточные технологии: В 2 т. Под ред. М.А. Пальцева. М.: Медицина; Шико, 2009. Т. 2. С. 311–380. [Zakhidov S.T., Kulibin A.Yu., Marshak T.L. Stem cells and spermatogonial niche cells. In: Stem cell biology and cell technology: In 2 volumes. Ed.M. A. Paltsev. Moscow: Meditsina; Shiko, 2009. V. 2. P. 311–380. (In Russ.)].

3. Черных В.Б. AZF делеции – частая генетическая причина бесплодия у мужчин: современное состояние исследований. Проблемы репродукции 2009;1:10–5. [Chernykh V.B. AZF deletions as a common cause of infertility in males: Current state of the research. Problemy reproduktsii = Russian Journal of Human Reproduction 2009;1:10–5. (In Russ.)].

4. Курило Л.Ф., Штаут М.И. Генетические и эпигенетические механизмы регуляции, хронология и динамика сперматогенеза у млекопитающих. Андрология и генитальная хирургия 2015;(1):31–40. [Kurilo L.F., Shtaut M.I. Genetic and epigenetic mechanisms of regulation, chronology and dynamics of spermatogenesis of mammals. Andrologiya i genitalnaya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2015;16(1):31–40. (In Russ.)].

5. Брагина Е.Е., Сорокина Т.М., Арифулин Е.А., Курило Л.Ф. Генетически обусловленные формы патозооспермии. Обзор литературы и результаты исследований. Андрология и генитальная хирургия 2015;16(3):29– 39. [Bragina E.E., Sorokina T.M., Arifulin E.A., Kurilo L.F. Genetically determined patozoospermia. Literature review and research results. Andrologiya i genitalnaya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2015;16(3):29–39. (In Russ.)].

6. Курило Л.Ф. Возможности цитогенетического исследования мейоза при мужском бесплодии. Цитология и генетика 1989;23(2):63–70. [Kurilo L.F. Cytogenetic study of meiosis in male infertility. Tsitologiya i genetika = Cytology and Genetics 1989;23(2):63–70. (In Russ.)].

7. Курило Л.Ф. Гаметогенез человека: выявление и анализ аномалий хромосом и гамет в целом, тестирование гаметотоксического эффекта повреждающих факторов. Лабораторное дело 1989;(10):4–8. [Kurilo L.F. Gametogenesis in humans: Identification and analysis of anomalies in chromosomes and gametes as a whole, evaluation of gametotoxic effects of damaging factors. Laboratornoe delo = Laboratory Science 1989;(10):4–8. (In Russ.)].

8. Захидов С.Т. Процессы нормального и атипичного сперматогенеза у животных. Автореф. дис. … д-ра биол. наук. М., 1993. 45 с. [Zakhidov S.T. Processes of normal and atypical spermatogenesis in animals. MD dissertation summary, 03.00.11. Moscow, 1993. 45 p. (In Russ.)].

9. Рузен-Ранге Э. Сперматогенез у животных. М.: Мир, 1980. 255 с. [Ruzen-Range E. Spermatogenesis in animals. Moscow: Mir, 1980. 255 p. (In Russ.)].

10. Семенова-Тян-Шанская А.Г. Первичные половые клетки зародыша человека в период миграции к зачаткам гонад. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии 1969;56(6):3–8. [Semenova-Tyan-Shanskaya A.G. Primary germ line cells in human embryo during migration to gonadal primordium. Arkhiv anatomii, gistologii i embriologii = Archive of Anatomy, Histology, and Embryology 1969;56(6):3–8. (In Russ.)].

11. Wilhelm D., Palmer S., Koopman P. Sex determination and gonadal development in mammals. Physiol Rev 2007;87(1):1–28.

12. Clermont Y. Renewal of spermatogonia in man. Am J Anat 1966;118:509–524.

13. Ehmcke J., Schlatt S. A revised model for spermatogonial expansion in man: lessons from non-human primates. Reproduction 2006;132(5):673–80.

14. Райцина С.С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Наука, 1985. 207 с. [Raytsina S.S. Spermatogenesis and structural basics of its regulation. Moscow: Nauka, 1985. 207 p. (In Russ.)].

15. Голиченков В.А., Иванов Е.А., Никерясова Е.Н. Эмбриология. М.: Академия, 2004. 224 с. [Golichenkov V.A., Ivanov E.A., Nikeryasova E.N. Embryology. Moscow: Akademiya, 2004. 224 p. (In Russ.)].

16. Ченцов Ю.С. Введение в клеточную биологию. М.: Академкнига, 2004. 495 с. [Chentsov Yu.S. Introduction to cell biology. Moscow: Akademkniga, 2004. 495 p. (In Russ.)].

17. Кузнецов С.Л., Мушкамбаров Н.Н. Гистология, цитология и эмбриология. М.: Медицинское информационное агентство, 2007. 600 с. [Kuznetsov S.L. Mushkambarov N.N. Histology, cytology, and embryology. Moscow: Meditsinskoe informatsionnoe agentstvo, 2007. 600 p. (In Russ.)].

18. Хилькевич Л.В., Курило Л.Ф. Кинетика популяции мужских половых клеток человека в антенатальном периоде онтогенеза. Онтогенез 1992;23(5):506–10. [Khilkevich L.V., Kurilo L.F. Kinetics of male sex cells in antenatal period of ontogenesis. Ontogenez = Russian Journal of Developmental Biology 1992;23(5):506–10. (In Russ.)].

19. Богданов Ю.Ф., Коломиец О.Л. Синаптонемный комплекс – индикатор динамики мейоза и изменчивости хромосом. M.: КМК, 2007. 358 с. [Bogdanov Yu.F., Kolomiets O.L. Synaptonemal complex as an indicator of meiosis dynamics and chromosome variability. Moscow: KMK, 2007. 358 p. (In Russ.)].

20. Oliva R. Protamines and male infertility. Hum Reprod Update 2006;12(4):417–35.

21. Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека. Пер. с англ. Н.П. Макарова. Науч. ред. Л.Ф. Курило. 5-е изд. М.: Капитал Принт, 2012. 291 с. [WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. Translation from English by N.P. Makarov. Ed.L. F. Kurilo. 5th edition. Moscow: Kapital Print, 2012. 291 p. (In Russ.)].

22. Курило Л.Ф. Способ цитологической диагностики нарушения сперматогенеза. Патент на изобретение № 2328736 от 01.02.2007. [Kurilo L.F. Method of cytological diagnostics of spermatogenetic disorders. Patent # 2328736 from 01.02.2007. (In Russ.)].

23. Курило Л.Ф., Дубинская В.П., Остроумова Т.В. и др. Оценка сперматогенеза по незрелым половым клеткам эякулята. Проблемы репродукции 1995;3:33–8. [Kurilo L.F., Dubinskaya V.P., Ostroumova T.V. et al. Spermatogenesis evaluation using immature sex cells of the ejaculate. Problemy reproduktsii = Russian Journal of Human Reproduction 1995;3:33–8. (In Russ.)].

24. Corea M., Campagnone J., Sigman M. The diagnosis of azoospermia depends on the force of centrifugation. Fertility and Sterility 2005;83(4):920–2.

25. Гамидов С.И., Попова А.Ю., Овчинников Р.И. Необструктивная азооспермия – клинические рекомендации. РМЖ 2015;23(11):595–601. [Gamidov S.I., Popova A.Yu. Ovchinnikov R.I. Non-obstructive azoospermia: Clinical guidelines. RMZh = Russian Medical Journal 2015;23(11):595–601. (In Russ.)].

26. Okada H., Dobashi M., Yamazaki T. et al. Conventional versus microdissection testicular sperm extraction for nonobstructive azoospermia. J Urol 2002;168(3):1063–7.

27. Ron-El R., Strauss S., Friedler S. et al. Serial sonography and color flow Doppler imaging following testicular and epididymal sperm extraction. Hum Reproduct 1998;13(12):3390–3.

28. Аль-Шукри С.Х., Боровец С.Ю., Торопов В.А. и др. Частота обнаружения сперматозоидов и вероятность осложнений после различных видов биопсии яичка (TESA, TESE и MICRO-TESE) у больных с необструктивной азооспермией. Ученые записки СПб ГМУ им. акад. И.П. Павлова 2016;23(1):10–4. [Al-Shukri S.Kh., Borovets S.Yu., Toropov V.A. et al. The frequency of detection of sperm and probability of postoperation complications after TESA, TESE and micro-TESE in patients with non-obstructive azoospermia. Uchenie zapiski SPbGMU imeni akademika I.P. Pavlova = Record of the I.P. Pavlov Saint-Petersburg State Medical University 2016;23(1):10–4. (In Russ.)].

29. Schlegel P.N. Testicular sperm extraction: microdissection improves sperm yield with minimal tissue excision. Hum Reprod 1999;14:131–5.

30. Nieschlag E., Behre H.M., Nieschlag S. (eds.) Andrology: male reproductive health and dysfunction. 3rd ed. Berlin; Heidelberg: Springer Verlag, 2010. 629 р.

31. Курило Л.Ф., Чеботарев А.Н., Шилейко Л.В. и др. Сравнительный анализ соотношения незрелых половых клеток на разных стадиях их дифференцировки в биоптате яичка и эякуляте у пациентов с азоои олигозооспермией. Проблемы репродукции 1997;(1):80–4. [Kurilo L.F., Chebotarev A.N., Shileyko L.V. et al. Comparative analysis of the ratio between immature sex cells in different differentiation stages in testicular biopsy samples and ejaculates of patients with azooand oligozoospermia. Problemy reproduktsii = Russian Journal of Human Reproduction 1997;1:80–4. (In Russ.)].

32. Курило Л.Ф., Королев Ю.Н., Никулина Л.А. и др. Анализ влияния общего облучения на сперматогенез и систему кроветворения крыс. Подходы к первичной профилактике радиационного облучения, приводящей к коррекции индуцированных нарушений. Андрология и генитальная хирургия 2004; (1–2):64–6. [Kurilo L.F., Korolev Yu.N., Nikulina L.A. et al. Analysis of the effect of general irradiation on spermatogenesis and hematopoiesis in rats. Methods of primary prevention of irradiation leading to correction of induced disorders. Andrologiya i genitalnaya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2004; 1–2:64–6. (In Russ.)].

33. Курило Л.Ф., Макарова Н.П., Шилейко Л.В. Система оценки состояния сперматогенеза человека и млекопитающих. Андрология и генитальная хирургия 2005;4:8–17. [Kurilo L.F., Makarova N.P., Shileiko L.V. System of assessment of the state of spermatogenesis of humand and mammals(clinical lectures). Andrologiya i genitalnaya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2005;(4):8–17. (In Russ.)].

34. Королев Ю.Н., Курило Л.Ф., Гениатулина М.С., Никулина Л.А. Структурно-функциональные нарушения в семенниках крыс в условиях острого иммобилизационного стресса. Андрология и генитальная хирургия 2012;13(4):25–8. [Korolev Y.N., Kurilo L.F., Geniatulina M.S., Nikulina O.A. Structural and functional testicular anomalies in male rats exposed to acute immobilization stress. Andrologiya i genitalnaya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2012;13(4):25–8 (In Russ.)].

35. Павлюченкова С.М. Изучение закономерностей развития мужских половых клеток и клеток Сертоли у мышей после различных экспериментальных воздействий. Автореф. дис. … канд. биол. наук. М., 2015. 23 с. [Pavluchenkova S.M. Study of principles of development of male sex cells and Sertoli cells in mice after different experimental treatments. PhD dissertation summary 03.03.05. Moscow, 2015. 23 p. (In Russ.)].

36. Игнатьева Е.Л., Курило Л.Ф. Антенатальный оогенез у мышей и его экспериментальная модификация. Онтогенез 1984;15(2):206–11. [Ignatieva E.L., Kurilo L.F. Antenatal oogenesis in mice and its experimental modification. Ontogenez = Russian Journal of Developmental Biology 1984;15(2):206–11. (In Russ.)].

37. Курило Л.Ф., Игнатьева Е.Л., Хилькевич Л.В., Леонов Б.В. Нарушение пролиферации оогониев при введении в культуру яичников плодов окситетрациклина либо 17-β-эстрадиола. Акушерство и гинекология 1985;(4): 53–5. [Kurilo L.F., Ignatieva E.L., Khilkevich L.V., Leonov B.V. Alteration of proliferation of oogoniums after introduction of oxytetracycline or 17-β-estradiol into fetal ovary culture. Akusherstvo i ginekologiya = Obstetrics and Gynecology 1985;4:53–5. (In Russ.)].